• Articles
• admin

Diferența cheie – hârtie vs strat subțire vs cromatografie pe coloană

cromatografia pe hârtie, cromatografia pe strat subțire și cromatografia pe coloană sunt trei tipuri de tehnici cromatografice. Diferența cheie dintre cromatografia pe hârtie, cromatografia în strat subțire și cromatografia pe coloană se bazează pe tipul de fază staționară utilizat în tehnica cromatografiei. Cromatografia pe hârtie folosește o hârtie de celuloză ca fază staționară, cromatografia în strat subțire folosește alumină sau silicagel ca fază staționară, în timp ce cromatografia pe coloană folosește o coloană ambalată cu un material matricial adecvat ca fază staționară.

în procesul de separare și identificare a biomoleculelor precum proteinele și carbohidrații, cromatografia este o tehnică biofizică importantă utilizată. Cromatografia separă compușii pe baza solubilității, dimensiunii și încărcării lor. Pe baza mecanismului de separare, cromatografia folosește mecanisme precum schimbul de ioni, absorbția, partiția și excluderea mărimii și există trei tehnici cromatografice; și anume, hârtie, strat subțire și cromatografie pe coloană. Cromatografia hârtiei se bazează pe adsorbția solid-lichid și solubilitatea compusului și folosește o hârtie de celuloză ca fază staționară. Cromatografia în strat subțire se bazează pe adsorbția solid-lichidă a moleculelor. Are o fază staționară care este de obicei realizată din alumină sau silicagel și faza mobilă care este solventul. Cromatografia coloanei folosește o coloană ambalată cu o matrice care este utilizată pentru a separa moleculele în principal pe baza dimensiunii, afinității sau încărcării lor.

cuprins

1. Prezentare generală a cromatografiei și a diferenței cheie
2. Ce este cromatografia pe hârtie
3. Ce este cromatografia în strat subțire
4. Ce este cromatografia coloanei
5. Asemănări între cromatografia pe hârtie, strat subțire și coloană
6. Comparație alăturată-hârtie vs strat subțire vs cromatografie coloană în formă tabelară
7. Rezumat

ce este cromatografia pe hârtie?

cromatografia pe hârtie este cel mai simplu tip de cromatografie utilizat și nu este utilizat pentru cercetări ample. Este utilizat în principal în laboratoarele studențești pentru a identifica biomolecule precum aminoacizii și carbohidrații prezenți în amestecuri. Cromatografia hârtiei folosește o fază staționară care se face folosind hârtie de celuloză sau hârtie de filtru Whatman și o fază mobilă care este de obicei preparată folosind solvenți organici precum n-butanol etc. Faza staționară este saturată cu apă, făcând faza staționară lichidă. Astfel, atunci când compușii sunt observați și lăsați să curgă în prezența fazei mobile, în funcție de solubilitatea compușilor, aceștia sunt separați. Astfel, la dezvoltarea cromatogramei, se poate face colorarea pentru a determina lungimea fiecărui compus. Factorul de retenție poate fi astfel calculat.

cromatografia pe hârtie poate fi clasificată în continuare ca cromatografie pe hârtie ascendentă și cromatografie pe hârtie descendentă în funcție de direcția solventului de rulare.

ce este cromatografia în strat subțire?

cromatografia în strat subțire sau TLC este o tehnică frecvent utilizată pentru a identifica diferiți aminoacizi prezenți într-un amestec sau pentru identificarea proteinelor. Tehnica de separare se bazează pe adsorbția solid-lichid. În timpul cromatografiei în strat subțire, o placă din alumină sau silicagel este utilizată ca fază staționară. Amestecul de solvent variază în funcție de cerință și poate utiliza diferite combinații de compuși organici, cum ar fi n-butanol, acid acetic și apă pentru a prepara solventul. Compușii care trebuie separați sunt observați pe placă și imersați în amestecul de solvent. Odată ce solventul se deplasează în sus pe baza acțiunii capilare date de placă, compușii observați pe placă se mișcă, de asemenea, în funcție de solubilitatea lor în solvent.

detectarea petelor după cromatogramă se realizează prin diferite proceduri de colorare. Unii folosesc colorarea cu ninhidrină, care este destul de o metodă toxică de colorare. Cromatogramele moderne cu strat subțire utilizează tehnici de fluorescență pentru a vizualiza cromatograma după alergare. În funcție de distanțele parcurse, se poate calcula timpul de retenție al fiecărui compus. Aceasta poate fi utilizată pentru a identifica tipul de compus separat pe baza amestecului utilizat. TLC este utilizat în principal pentru a identifica aminoacizii într-un amestec de proteine și, de asemenea, pentru a separa diferite tipuri de monozaharide prezente într-un amestec.

ce este cromatografia pe coloane?

cromatografia coloanei este un termen larg folosit pentru a descrie multe tipuri de tehnici de cromatografie care utilizează metoda de separare bazată pe coloană. În cromatografia coloanei, o coloană fizică este utilizată cu un material de ambalare pentru a separa compușii. Separarea se poate baza pe diferite proprietăți fizice expuse de compuși. Aceste proprietăți pot fi încărcarea, dimensiunea, conformația 3D și capacitatea de legare etc. Astfel, coloana ambalată cu materialul matricei acționează ca faza staționară, iar tamponul de spălare aplicat coloanei acționează ca faza mobilă.

dacă moleculele sunt separate în funcție de dimensiune, materialul de ambalare este ambalat într-un mod care lasă porii pentru ca compușii să călătorească. Astfel, moleculele mai mari care nu pot curge prin pori sunt eluate mai întâi, în timp ce moleculele mai mici necesită mult mai mult timp pentru a Eluta.

dacă moleculele sunt separate în funcție de sarcina lor, faza staționară va conține fie un schimbător de anioni, fie de cationi la care compușii vor fi atrași în funcție de sarcina lor. Astfel, în timpul etapei de spălare, compușii ne-legați vor fi eluați. La adăugarea tamponului de eluție, compușii încărcați legați vor fi eluați. Detectarea acestor eluenți se bazează în mare parte pe tehnici spectrofotometrice.

care sunt asemănările dintre stratul subțire de hârtie și cromatografia pe coloană?

• toate cromatografia stratului subțire de hârtie și a coloanei trei tehnici sunt utilizate pentru separarea biomoleculelor, cum ar fi aminoacizii, proteinele și carbohidrații.
• tehnicile de cromatografie cu strat subțire de hârtie și coloană au o fază mobilă și o fază staționară.
• tehnicile de cromatografie cu strat subțire de hârtie și coloană utilizează mecanisme biofizice pentru separare.

care este diferența dintre stratul subțire de hârtie și cromatografia pe coloană?

hârtie vs strat subțire vs cromatografie coloană
cromatografia pe hârtie	cromatografia pe hârtie este o tehnică cromatografică utilizată pentru separarea compușilor pe baza adsorbției lichid-lichid și a solubilității compusului. Folosește o hârtie de celuloză ca fază staționară.
cromatografia în strat subțire	cromatografia în strat subțire este o altă tehnică cromatografică bazată pe adsorbția solid-lichid a moleculelor. Are o fază staționară din alumină sau silicagel și un solvent ca fază mobilă, care este solventul.
cromatografia coloanei	cromatografia coloanei folosește o coloană ambalată cu o matrice care este utilizată pentru a separa moleculele în principal pe baza dimensiunii, afinității sau încărcării lor.
faza staționară
cromatografia hârtiei	hârtia din nitroceluloză de Whatman este utilizată ca fază staționară în cromatografia hârtiei.
cromatografia în strat subțire	Alumina sau silicagelul este utilizată ca fază staționară a cromatografiei în strat subțire.
cromatografia coloanei	o coloană ambalată cu material de ambalare adecvat este utilizată ca fază staționară în cromatografia coloanei.
faza mobilă
cromatografia hârtiei	solventul de rulare este faza mobilă a cromatografiei hârtiei.
cromatografia în strat subțire	solventul de rulare este faza mobilă a cromatografiei în strat subțire.
cromatografia coloanei	tamponul de spălare este faza mobilă a cromatografiei coloanei.
mecanisme utilizate pentru separare
cromatografia pe hârtie	cromatografia pe hârtie se bazează pe absorbția solid-lichid.
cromatografia în strat subțire	cromatografia în strat subțire se bazează pe absorbția solid-lichid.
cromatografia coloanei	cromatografia coloanei se bazează pe excluderea dimensiunii, încărcarea și forma.
tampon de eluție
cromatografia pe hârtie	nu este necesară pentru cromatografia pe hârtie.
cromatografia în strat subțire	nu este necesară pentru cromatografia în strat subțire.
cromatografia pe coloană	necesară în cromatografia pe coloană.
detecție
cromatografie pe hârtie	colorare și prin determinarea factorului de retenție.
cromatografie în strat subțire	colorare și prin determinarea factorului de retenție.
cromatografie pe coloană	determinare spectrofotometrică.

rezumat-strat subțire de hârtie vs cromatografie pe coloană

cromatografia pe hârtie, TLC și cromatografia pe coloană sunt tehnici de separare utilizate pentru a separa biomolecule precum proteine, aminoacizi și carbohidrați (în principal monozaharide). Cromatografia hârtiei folosește o hârtie de celuloză ca fază staționară, iar mecanismul de separare se bazează pe adsorbția solid-lichid. TLC utilizează, de asemenea, mecanisme de adsorbție solid-lichid. Moleculele sunt separate pe faza staționară, în funcție de solubilitatea lor în faza mobilă. Cromatografia coloanei folosește proprietăți fizice precum dimensiunea, forma, sarcina și greutatea moleculară a compusului pentru a se separa. Coloana ambalată cu materialul matricei acționează ca fază staționară, în timp ce tamponul de spălare acționează ca fază de solvent. Aceasta este diferența dintre un strat subțire de hârtie și cromatografia coloanei.

referință:

1.Clark, Jim. „CROMATOGRAFIE ÎN STRAT SUBȚIRE.”Cromatografie În Strat Subțire, 2007. Disponibil aici
2.Coskun, Ozlem. „Tehnici De Separare: Cromatografie.”Clinicile nordice din Istanbul, Editura Kare, 2016. Disponibil aici

pentru imagine:

1.’Rezervor de cromatografie ‘(CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2.’Secvența Tlc’ de Quantockgoblin, (domeniu Public) via Commons Wikimedia
3.’Cromatografie coloană’ (domeniu Public) via Commons Wikimedia