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Diferencia Clave: Cromatografía de Capa Delgada de papel y de Columna

La cromatografía de papel, la cromatografía de capa delgada y la cromatografía de columna son tres tipos de técnicas cromatográficas. La diferencia clave entre la cromatografía en papel, la cromatografía de capa delgada y la cromatografía en columna se basa en el tipo de fase estacionaria utilizada en la técnica de cromatografía. La cromatografía de papel utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria, la cromatografía de capa fina utiliza alúmina o gel de sílice como fase estacionaria, mientras que la cromatografía de columna utiliza una columna empaquetada con un material de matriz adecuado como fase estacionaria.

En el proceso de separación e identificación de biomoléculas como proteínas e hidratos de carbono, la cromatografía es una técnica biofísica importante utilizada. La cromatografía separa los compuestos en función de su solubilidad, tamaño y carga. Basado en el mecanismo de separación, la cromatografía utiliza mecanismos como el intercambio iónico, la absorción, la partición y la exclusión de tamaño y hay tres técnicas cromatográficas; a saber, cromatografía de papel, de capa delgada y de columna. La cromatografía de papel se basa en la adsorción sólido-líquido y la solubilidad del compuesto, y utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria. La cromatografía de capa fina se basa en la adsorción sólido-líquido de moléculas. Tiene una fase estacionaria que normalmente está hecha de alúmina o gel de sílice y la fase móvil que es el disolvente. La cromatografía en columna utiliza una columna empaquetada con una matriz que se utiliza para separar moléculas principalmente en función de su tamaño, afinidad o carga.

CONTENIDO

1. Descripción general de la Cromatografía y Diferencia clave
2. Qué es la cromatografía de papel
3. Qué es la Cromatografía de capa delgada
4. Qué es la cromatografía en columna
5. Similitudes Entre la Cromatografía de Papel, Capa Fina y Columna
6. Comparación lado a Lado-Cromatografía de papel vs Capa Delgada vs Columna en Forma Tabular
7. Resumen

¿Qué es la Cromatografía de papel?

La cromatografía en papel es el tipo de cromatografía más simple utilizado, y no se utiliza para investigaciones exhaustivas. Se utiliza principalmente en laboratorios de estudiantes para identificar biomoléculas como aminoácidos e hidratos de carbono presentes en mezclas. La cromatografía de papel utiliza una fase estacionaria que se hace con papel de celulosa o papel de filtro Whatman y una fase móvil que generalmente se prepara con disolventes orgánicos como n-butanol, etc. La fase estacionaria se satura con agua, haciendo que la fase estacionaria sea líquida. Por lo tanto, cuando los compuestos son vistos y permite ejecutar en la presencia de la fase móvil, dependiendo de la solubilidad de los compuestos, que están separados. Por lo tanto, tras el desarrollo del cromatograma, se puede realizar una tinción para determinar la longitud de cada compuesto. De este modo se puede calcular el factor de retención.

La cromatografía de papel se puede clasificar además como cromatografía de papel ascendente y cromatografía de papel descendente dependiendo de la dirección del disolvente en marcha.

¿Qué es la Cromatografía de Capa Delgada?

La cromatografía de capa delgada o TLC es una técnica comúnmente utilizada para identificar diferentes aminoácidos presentes en una mezcla o para la identificación de proteínas. La técnica de separación se basa en la adsorción sólido-líquido. Durante la cromatografía de capa fina, se utiliza una placa de alúmina o gel de sílice como fase estacionaria. La mezcla de solventes varía según los requisitos y puede usar diferentes combinaciones de compuestos orgánicos como n-butanol, ácido acético y agua para preparar el solvente. Los compuestos a separar se manchan en la placa y se sumergen en la mezcla de disolventes. Una vez que el disolvente se desplaza hacia arriba en función de la acción capilar dada por la placa, los compuestos manchados en la placa también se mueven dependiendo de su solubilidad en el disolvente.

La detección de las manchas después del cromatograma se realiza mediante diferentes procedimientos de tinción. Algunos usan tinción de ninhidrina que es un método bastante tóxico de tinción. Los cromatogramas modernos de capa delgada utilizan técnicas de fluorescencia para ver el cromatograma después de la carrera. Dependiendo de las distancias recorridas, se puede calcular el tiempo de retención de cada compuesto. Esto se puede utilizar para identificar el tipo de compuesto separado en función de la mezcla utilizada. El TLC se utiliza principalmente para identificar aminoácidos en una mezcla de proteínas y también para separar diferentes tipos de monosacáridos presentes en una mezcla.

¿Qué es la Cromatografía en columna?

La cromatografía de columna es un término amplio utilizado para describir muchos tipos de técnicas de cromatografía que utilizan el método de separación basado en columnas. En la cromatografía en columna, se utiliza una columna física con un material de embalaje para separar los compuestos. La separación puede basarse en diferentes propiedades físicas exhibidas por los compuestos. Estas propiedades pueden ser la carga,el tamaño, la conformación 3D y la capacidad de unión, etc. Por lo tanto, la columna embalada con el material de matriz actúa como la fase estacionaria y el amortiguador de lavado aplicado a la columna actúa como la fase móvil.

Si las moléculas se separan en función del tamaño, el material de embalaje se envasa de manera que deja poros para que los compuestos viajen a través de ellos. Por lo tanto, las moléculas más grandes que no pueden fluir a través de los poros se eluyen primero, mientras que las moléculas más pequeñas tardan mucho más tiempo en eluirse.

Si las moléculas se separan en función de su carga, la fase estacionaria contendrá un intercambiador de aniones o cationes al que los compuestos se atraerán en función de su carga. Por lo tanto, durante la etapa de lavado, los compuestos no unidos se eluirán. Al agregar el tampón de elución, los compuestos cargados enlazados se eluirán. La detección de estos eluentes se basa principalmente en técnicas espectrofotométricas.

¿Cuáles son las Similitudes Entre la Cromatografía de Capa Delgada de Papel y la Cromatografía en Columna?

• Todas las técnicas de Cromatografía de Capa Delgada y Columna de papel se utilizan para separar biomoléculas como aminoácidos, proteínas y carbohidratos.
• Las técnicas de cromatografía de capa delgada y columna de papel tienen una fase móvil y una fase estacionaria.
• Las técnicas de Cromatografía de Capa Delgada y Columna de papel utilizan mecanismos biofísicos para la separación.

¿Cuál es la Diferencia Entre la Cromatografía de Capa Fina de Papel y la Cromatografía en Columna?

Cromatografía de papel vs Capa Delgada vs Columna
Cromatografía de papel	La cromatografía de papel es una técnica cromatográfica que se utiliza para separar compuestos en función de la adsorción líquido-líquido y la solubilidad del compuesto. Utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria.
Cromatografía de capa fina	La cromatografía de capa fina es otra técnica cromatográfica basada en la adsorción sólido-líquido de moléculas. Tiene una fase estacionaria hecha de alúmina o gel de sílice y un disolvente como fase móvil, que es el disolvente.
Cromatografía en columna	La cromatografía en columna utiliza una columna empaquetada con una matriz que se utiliza para separar moléculas principalmente en función de su tamaño, afinidad o carga.
Fase Estacionaria
Cromatografía de papel	El papel hecho de nitrocelulosa de Whatman se utiliza como fase estacionaria en la cromatografía de papel.
Cromatografía de capa delgada	La alúmina o el gel de sílice se utilizan como fase estacionaria de la cromatografía de capa delgada.
Cromatografía de columna	Una columna embalada con el material de embalaje adecuado se utiliza como fase estacionaria en la cromatografía de columna.
Fase Móvil
Cromatografía de papel	El disolvente corriente es la fase móvil de la cromatografía de papel.
Cromatografía de capa delgada	El solvente corriente es la fase móvil de la cromatografía de capa delgada.
Cromatografía de columna	El tampón de lavado es la fase móvil de la cromatografía de columna.
Mecanismos Utilizados para la Separación
Cromatografía de papel	La cromatografía de papel se basa en la absorción sólido-líquido.
Cromatografía de capa fina	La cromatografía de capa fina se basa en la absorción sólido-líquido.
Cromatografía de columna	La cromatografía de columna se basa en la exclusión de tamaño, carga y forma.
Tampón de Elución
Cromatografía en papel	No requerida por la cromatografía en papel.
Cromatografía de capa fina	No se requiere para cromatografía de capa fina.
Cromatografía de columna	Requerida en cromatografía de columna.
Detección
Cromatografía de papel	Tinción y determinación del factor de retención.
Cromatografía de capa fina	Tinción y determinación del factor de retención.
Cromatografía en columna	Determinación espectrofotométrica.

Resumen-Cromatografía de capa delgada de papel vs Cromatografía de columna

La cromatografía de papel, TLC y cromatografía de columna son técnicas de separación utilizadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos e hidratos de carbono (principalmente monosacáridos). La cromatografía de papel utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria, y el mecanismo de separación se basa en la adsorción sólido-líquido. TLC también utiliza mecanismos de adsorción sólido-líquido. Las moléculas se separan en la fase estacionaria, dependiendo de su solubilidad en la fase móvil. La cromatografía en columna utiliza propiedades físicas como el tamaño, la forma, la carga y el peso molecular del compuesto para separarse. La columna embalada con el material de matriz actúa como la fase estacionaria, mientras que el tampón de lavado actúa como la fase solvente. Esta es la diferencia entre una capa delgada de papel y la cromatografía en columna.

Referencia:

1.Clark, Jim. «CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA.»Thin Layer Chromatography, 2007. Disponible aquí
2.Coskun, Ozlem. «Separation Techniques: Chromatography.»Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Disponible aquí

Imagen cortesía:

1.’Tanque de cromatografía’ (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia
2.’Secuencia Tlc’ por Quantockgoblin, (Dominio Público) a través de Commons Wikimedia
3.’Cromatografía en columna ‘(Dominio Público) a través de Commons Wikimedia