• Articles
• admin

klíčový rozdíl-papír vs tenká vrstva vs sloupcová chromatografie

papírová chromatografie, chromatografie na tenké vrstvě a chromatografie na sloupci jsou tři typy chromatografických technik. Klíčový rozdíl mezi papírovou chromatografií, chromatografií na tenké vrstvě a sloupcovou chromatografií je založen na typu stacionární fáze použité v chromatografické technice. Papírová chromatografie používá jako stacionární fázi celulózový papír, Chromatografie na tenké vrstvě používá jako stacionární fázi oxid hlinitý nebo silikagel, zatímco sloupcová chromatografie používá jako stacionární fázi kolonu naplněnou vhodným matricovým materiálem.

v procesu separace a identifikace biomolekul, jako jsou proteiny a sacharidy, je chromatografie důležitou biofyzikální technikou. Chromatografie odděluje sloučeniny na základě jejich rozpustnosti, velikosti a náboje. Na základě separačního mechanismu používá chromatografie mechanismy, jako je iontová výměna, absorpce, rozdělení a vyloučení velikosti a existují tři chromatografické techniky; jmenovitě papír, tenká vrstva a sloupcová chromatografie. Papírová chromatografie je založena na adsorpci pevná látka-kapalina a rozpustnosti sloučeniny a používá jako stacionární fázi celulózový papír. Chromatografie na tenké vrstvě je založena na adsorpci molekul pevná látka-kapalina. Má stacionární fázi, která je obvykle vyrobena z oxidu hlinitého nebo silikagelu a mobilní fáze, která je rozpouštědlem. Sloupcová chromatografie používá kolonu nabitou matricí, která se používá k oddělení molekul hlavně na základě jejich velikosti, afinity nebo jejího náboje.

obsah

1. Přehled chromatografie a klíčový rozdíl
2. Co je papírová chromatografie
3. Co je Chromatografie na tenké vrstvě
4. Co je sloupcová chromatografie
5. Podobnosti mezi papírovou, tenkou vrstvou a sloupcovou chromatografií
6. Srovnání vedle sebe-papír vs tenká vrstva vs sloupcová chromatografie v tabulkové formě
7. Shrnutí

co je papírová chromatografie?

papírová chromatografie je nejjednodušší typ použité chromatografie a nepoužívá se pro rozsáhlý výzkum. Používá se hlavně ve studentských laboratořích k identifikaci biomolekul, jako jsou aminokyseliny a uhlohydráty přítomné ve směsích. Papírová chromatografie používá stacionární fázi, která se vyrábí pomocí celulózového papíru nebo Whatmanova filtračního papíru, a mobilní fázi, která se obvykle připravuje za použití organických rozpouštědel, jako je n-butanol atd. Stacionární fáze je nasycena vodou, čímž se stacionární fáze stává kapalinou. Když jsou tedy sloučeniny spatřeny a nechány běžet v přítomnosti mobilní fáze, v závislosti na rozpustnosti sloučenin se oddělí. Při vývoji chromatogramu lze tedy provést barvení, aby se určila délka běhu každé sloučeniny. Tím lze vypočítat retenční faktor.

papírová chromatografie může být dále klasifikována jako vzestupná papírová chromatografie a sestupná papírová chromatografie v závislosti na směru běžícího rozpouštědla.

co je Chromatografie na tenké vrstvě?

Chromatografie na tenké vrstvě nebo TLC je běžně používaná technika pro identifikaci různých aminokyselin přítomných ve směsi nebo pro identifikaci proteinů. Technika separace je založena na adsorpci pevná látka-kapalina. Během chromatografie na tenké vrstvě se jako stacionární fáze používá deska vyrobená z oxidu hlinitého nebo silikagelu. Směs rozpouštědel se mění podle požadavku a může k přípravě rozpouštědla použít různé kombinace organických sloučenin, jako je n-butanol, kyselina octová a voda. Sloučeniny, které mají být odděleny, jsou spatřeny na desce a ponořeny do směsi rozpouštědel. Jakmile rozpouštědlo putuje nahoru na základě kapilárního působení daného deskou, sloučeniny spatřené na desce se také pohybují v závislosti na jejich rozpustnosti v rozpouštědle.

detekce skvrn po chromatogramu se provádí různými postupy barvení. Někteří používají barvení ninhydrinem, což je poměrně toxická metoda barvení. Moderní chromatogramy na tenké vrstvě používají fluorescenční techniky k zobrazení chromatogramu po běhu. V závislosti na ujetých vzdálenostech lze vypočítat retenční čas každé sloučeniny. To lze použít k identifikaci typu sloučeniny oddělené na základě použité směsi. TLC se používá hlavně k identifikaci aminokyselin v proteinové směsi a také k oddělení různých typů monosacharidů přítomných ve směsi.

co je to sloupcová chromatografie?

sloupcová chromatografie je široký termín používaný k popisu mnoha typů chromatografických technik, které používají metodu separace založenou na sloupcích. Ve sloupcové chromatografii se používá fyzikální kolona s obalovým materiálem k oddělení sloučenin. Separace může být založena na různých fyzikálních vlastnostech, které sloučeniny vykazují. Tyto vlastnosti mohou být náboj, velikost, 3D konformace a vazebná kapacita atd. Kolona naplněná matričním materiálem tedy působí jako stacionární fáze a promývací pufr aplikovaný na kolonu působí jako mobilní fáze.

pokud jsou molekuly odděleny na základě velikosti, obalový materiál je zabalen způsobem, který ponechává póry, aby sloučeniny mohly procházet. Větší molekuly, které nemohou protékat póry, jsou tedy eluovány jako první, zatímco menší molekuly eluují mnohem déle.

pokud jsou molekuly odděleny na základě jejich náboje, stacionární fáze bude obsahovat buď aniontový nebo kationtový výměník, ke kterému budou sloučeniny přitahovány na základě jejich náboje. Během pracího kroku se tedy nevázané sloučeniny eluují. Po přidání elučního pufru budou vázané nabité sloučeniny eluovány. Detekce těchto eluentů je většinou založena na spektrofotometrických technikách.

jaké jsou podobnosti mezi tenkou vrstvou papíru a sloupcovou chromatografií?

• všechny papírové tenké vrstvy a sloupcová chromatografie tři techniky se používají pro separaci biomolekul, jako jsou aminokyseliny, bílkoviny a sacharidy.
• techniky papírové tenké vrstvy a sloupcové chromatografie mají mobilní fázi a stacionární fázi.
• techniky tenkovrstvé a sloupcové chromatografie používají biofyzikální mechanismy pro separaci.

jaký je rozdíl mezi tenkou vrstvou papíru a sloupcovou chromatografií?

papír vs tenká vrstva vs sloupcová chromatografie
papírová chromatografie	papírová chromatografie je chromatografická technika používaná k oddělení sloučenin na základě adsorpce kapalina-kapalina a rozpustnosti sloučeniny. Jako stacionární fázi používá celulózový papír.
Chromatografie na tenké vrstvě	Chromatografie na tenké vrstvě je další chromatografická technika založená na adsorpci molekul pevná látka-kapalina. Má stacionární fázi vyrobenou z oxidu hlinitého nebo silikagelu a rozpouštědlo jako mobilní fáze, což je rozpouštědlo.
sloupcová chromatografie	sloupcová chromatografie používá kolonu nabitou matricí, která se používá k oddělení molekul hlavně na základě jejich velikosti, afinity nebo jejího náboje.
stacionární fáze
papírová chromatografie	papír vyrobený z nitrocelulózy Whatman se používá jako stacionární fáze v papírové chromatografii.
Chromatografie na tenké vrstvě	oxid hlinitý nebo silikagel se používá jako stacionární fáze chromatografie na tenké vrstvě.
sloupcová chromatografie	kolona naplněná vhodným obalovým materiálem se používá jako stacionární fáze ve sloupcové chromatografii.
mobilní fáze
papírová chromatografie	běžící rozpouštědlo je mobilní fáze papírové chromatografie.
Chromatografie na tenké vrstvě	běžící rozpouštědlo je mobilní fáze chromatografie na tenké vrstvě.
sloupcová chromatografie	promývací pufr je mobilní fáze sloupcové chromatografie.
mechanismy používané pro separaci
papírová chromatografie	papírová chromatografie je založena na absorpci pevná látka-kapalina.
Chromatografie na tenké vrstvě	Chromatografie na tenké vrstvě je založena na absorpci pevná látka-kapalina.
sloupcová chromatografie	sloupcová chromatografie je založena na vyloučení velikosti, náboje a tvaru.
eluční pufr
papírová chromatografie	není vyžadována papírovou chromatografií.
Chromatografie na tenké vrstvě	není nutná pro chromatografii na tenké vrstvě.
sloupcová chromatografie	vyžadována ve sloupcové chromatografii.
detekce
papírová chromatografie	barvení a stanovením retenčního faktoru.
Chromatografie na tenké vrstvě	barvení a stanovením retenčního faktoru.
sloupcová chromatografie	spektrofotometrické stanovení.

shrnutí – paper Thin Layer vs Column Chromatography

Paper chromatography, TLC a column chromatography jsou separační techniky používané k oddělení biomolekul, jako jsou proteiny, aminokyseliny a sacharidy (zejména monosacharidy). Papírová chromatografie používá jako stacionární fázi celulózový papír a mechanismus separace je založen na adsorpci pevná látka-kapalina. TLC také používá adsorpční mechanismy pevná látka-kapalina. Molekuly jsou odděleny ve stacionární fázi v závislosti na jejich rozpustnosti v mobilní fázi. Sloupcová chromatografie používá k oddělení fyzikální vlastnosti, jako je velikost, tvar, náboj a molekulová hmotnost sloučeniny. Kolona naplněná matričním materiálem působí jako stacionární fáze, zatímco promývací pufr působí jako fáze rozpouštědla. To je rozdíl mezi tenkou vrstvou papíru a sloupcovou chromatografií.

Reference:

1.Clarku, Jime. „CHROMATOGRAFIE NA TENKÉ VRSTVĚ.“Chromatografie Na Tenké Vrstvě, 2007. Dostupné zde
2.Coskun, Ozlem. „Separační Techniky: Chromatografie.“Severní kliniky Istanbulu, Kare Publishing, 2016. K dispozici zde

obrázek se svolením:

1.“Chromatografická nádrž“ (CC BY-SA 3.0) přes Commons Wikimedia
2.’TLC sekvence‘ by Quantockgoblin, (Public Domain) přes Commons Wikimedia
3.’Sloupcová chromatografie‘ (Public Domain) přes Commons Wikimedia