• Articles
• admin

nyckelskillnad – papper vs tunt lager vs kolonnkromatografi

Papperskromatografi, tunnskiktskromatografi och kolonnkromatografi är tre typer av kromatografiska tekniker. Huvudskillnaden mellan papperskromatografi, tunnskiktskromatografi och kolonnkromatografi baseras på typen av stationär fas som används i kromatografitekniken. Papperskromatografi använder ett cellulosapapper som sin stationära fas, tunnskiktskromatografi använder aluminiumoxid eller silikagel som sin stationära fas, medan kolonnkromatografi använder en kolonn packad med ett lämpligt matrismaterial som sin stationära fas.

i processen för separation och identifiering av biomolekyler såsom proteiner och kolhydrater är kromatografi en viktig biofysisk teknik som används. Kromatografi separerar föreningar baserat på deras löslighet, storlek och laddning. Baserat på separationsmekanismen använder kromatografi mekanismer som jonbyte, absorption, partition och storlek uteslutning och det finns tre kromatografiska tekniker; nämligen papper, tunt lager och kolonnkromatografi. Papperskromatografi är baserad på fast-flytande adsorption och löslighet av föreningen, och den använder ett cellulosapapper som den stationära fasen. Tunnskiktskromatografi är baserad på fast-flytande adsorption av molekyler. Den har en stationär fas som vanligtvis är gjord av aluminiumoxid eller silikagel och den mobila fasen som är lösningsmedlet. Kolonnkromatografi använder en kolonn packad med en matris som används för att separera molekyler huvudsakligen baserat på deras storlek, affinitet eller dess laddning.

innehåll

1. Översikt över kromatografi och nyckelskillnad
2. Vad är Papperskromatografi
3. Vad är tunnskiktskromatografi
4. Vad är kolonnkromatografi
5. Likheter mellan papper, tunt lager och kolonnkromatografi
6. Sida vid sida jämförelse-papper vs tunt lager vs kolonnkromatografi i tabellform
7. Sammanfattning

Vad är Papperskromatografi?

Papperskromatografi är den enklaste typen av kromatografi som används, och den används inte för omfattande forskning. Det används främst i studentlaboratorier för att identifiera biomolekyler som aminosyror och kolhydrater som finns i blandningar. Papperskromatografi använder en stationär fas som tillverkas med cellulosapapper eller Whatman-filterpapper och en mobil fas som vanligtvis framställs med organiska lösningsmedel som n-butanol, etc. Den stationära fasen är mättad med vatten, vilket gör den stationära fasen flytande. Således, när föreningarna upptäcks och får löpa i närvaro av mobilfasen, separeras de beroende på lösligheten hos föreningarna. Således, på utvecklingen av kromatogrammet, färgning kan göras för att bestämma körningen längden av varje förening. Retentionsfaktorn kan därmed beräknas.

Papperskromatografi kan vidare klassificeras som stigande papperskromatografi och fallande papperskromatografi beroende på riktningen för det löpande lösningsmedlet.

Vad är tunnskiktskromatografi?

tunnskiktskromatografi eller TLC är en vanlig teknik för att identifiera olika aminosyror närvarande i en blandning eller för identifiering av proteiner. Separationstekniken är baserad på fast-flytande adsorption. Under tunnskiktskromatografi används en platta av aluminiumoxid eller silikagel som stationär fas. Lösningsmedelsblandningen varierar beroende på kravet och kan använda olika kombinationer av organiska föreningar såsom n-butanol, ättiksyra och vatten för att förbereda lösningsmedlet. Föreningarna som ska separeras ses på plattan och nedsänktes i lösningsmedelsblandningen. När lösningsmedlet reser upp baserat på kapillärverkan som ges av plattan, rör sig föreningarna på plattan också beroende på deras löslighet i lösningsmedlet.

detektering av fläckarna efter kromatogrammet utförs med olika färgningsprocedurer. Vissa använder ninhydrin färgning som är ganska en giftig metod för färgning. Moderna tunnskiktskromatogram använder fluorescenstekniker för att se kromatogrammet efter körningen. Beroende på de Avstånd den har rest kan retentionstiden för varje förening beräknas. Detta kan användas för att identifiera typen av förening Separerad baserat på den använda blandningen. TLC används huvudsakligen för att identifiera aminosyror i en proteinblandning och även för att separera olika typer av monosackarider närvarande i en blandning.

Vad är kolonnkromatografi?

kolonnkromatografi är en bred term som används för att beskriva många typer av kromatografitekniker som använder kolonnbaserad separationsmetod. I kolonnkromatografi används en fysisk kolonn med ett förpackningsmaterial för att separera föreningarna. Separationen kan baseras på olika fysikaliska egenskaper som uppvisas av föreningarna. Dessa egenskaper kan vara laddning, storlek, 3D-konformation och bindningskapacitet etc. Således fungerar kolonnen packad med matrismaterialet som den stationära fasen och tvättbufferten applicerad på kolonnen fungerar som den mobila fasen.

om molekylerna separeras baserat på storleken packas förpackningsmaterialet på ett sätt som lämnar porer för föreningarna att resa igenom. Således elueras de större molekylerna som inte kan strömma genom porerna först, medan de mindre molekylerna tar mycket längre tid att eluera.

om molekylerna separeras baserat på deras laddning kommer den stationära fasen att innehålla antingen en anjon-eller katjonbytare till vilken föreningarna kommer att lockas baserat på deras laddning. Således under tvättsteget kommer de icke-bundna föreningarna att elueras. Vid tillsats av elueringsbufferten kommer de bundna laddade föreningarna att elueras. Detekteringen av dessa eluenter är mestadels baserad på spektrofotometriska tekniker.

vilka är likheterna mellan papperstunna lager och kolonnkromatografi?

• alla papperstunna skikt och kolonnkromatografi tre tekniker används för separation av biomolekyler såsom aminosyror, proteiner och kolhydrater.
• papperstunna skikt och Kolonnkromatografitekniker har en mobil fas och en stationär fas.
• papperstunna skikt och Kolonnkromatografitekniker använder biofysiska mekanismer för separation.

Vad är skillnaden mellan papperstunna lager och kolonnkromatografi?

papper vs tunt lager vs kolonnkromatografi
Papperskromatografi	Papperskromatografi är en kromatografisk teknik som används för att separera föreningar baserat på föreningens flytande-flytande adsorption och löslighet. Den använder ett cellulosapapper som sin stationära fas.
tunnskiktskromatografi	tunnskiktskromatografi är en annan kromatografisk teknik baserad på fast-flytande adsorption av molekyler. Den har en stationär fas gjord av aluminiumoxid eller silikagel och ett lösningsmedel som mobilfas, vilket är lösningsmedlet.
kolonnkromatografi	kolonnkromatografi använder en kolonn packad med en matris som används för att separera molekyler huvudsakligen baserat på deras storlek, affinitet eller dess laddning.
stationär fas
Papperskromatografi	papper tillverkat av nitrocellulosa av Whatman används som stationär fas i papperskromatografi.
tunnskiktskromatografi	aluminiumoxid eller silikagel används som den stationära fasen av tunnskiktskromatografi.
kolonnkromatografi	en kolonn packad med lämpligt förpackningsmaterial används som stationär fas i kolonnkromatografin.
mobil fas
Papperskromatografi	löpande lösningsmedel är den mobila fasen av papperskromatografi.
tunnskiktskromatografi	löpande lösningsmedel är den mobila fasen av tunnskiktskromatografi.
kolonnkromatografi	tvättbuffert är den mobila fasen av kolonnkromatografi.
mekanismer som används för Separation
Papperskromatografi	Papperskromatografi är baserad på fast-flytande absorption.
tunnskiktskromatografi	tunnskiktskromatografi baseras på fast-flytande absorption.
kolonnkromatografi	kolonnkromatografi baseras på uteslutning av storlek, laddning och form.
Elueringsbuffert
Papperskromatografi	krävs inte av papperskromatografi.
tunnskiktskromatografi	krävs inte för tunnskiktskromatografi.
kolonnkromatografi	krävs i kolonnkromatografi.
upptäckt
Papperskromatografi	färgning och genom att bestämma Retentionsfaktorn.
tunnskiktskromatografi	färgning och genom att bestämma Retentionsfaktorn.
kolonnkromatografi	spektrofotometrisk bestämning.

sammanfattning-papper tunt lager vs kolonnkromatografi

Papperskromatografi, TLC och kolonnkromatografi är separationstekniker som används för att separera biomolekyler såsom proteiner, aminosyror och kolhydrater (huvudsakligen monosackarider). Papperskromatografi använder ett cellulosapapper som stationär fas, och separationsmekanismen är baserad på fast-flytande adsorption. TLC använder också fast-flytande adsorptionsmekanismer. Molekylerna separeras på den stationära fasen, beroende på deras löslighet i mobilfasen. Kolonnkromatografi använder fysikaliska egenskaper såsom storlek, form, laddning och molekylvikten för föreningen att separera. Kolonnen packad med matrismaterialet fungerar som den stationära fasen, medan tvättbufferten fungerar som lösningsmedelsfasen. Detta är skillnaden mellan ett papperstunt skikt och kolonnkromatografi.

referens:

1.Clark, Jim. ”TUNNSKIKTSKROMATOGRAFI.”Tunnskiktskromatografi, 2007. Finns här
2.Coskun, Ozlem. ”Separationstekniker: Kromatografi.”Norra kliniker i Istanbul, kare Publishing, 2016. Finns här

bild med tillstånd:

1.’Kromatografi tank ’(CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2.’Tlc sekvens’ av Quantockgoblin, (Public Domain) via Commons Wikimedia
3.’Kolumnkromatografi’ (Public Domain) via Commons Wikimedia