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diferença fundamental – papel vs camada fina vs Cromatografia em coluna

cromatografia em papel, cromatografia em camada fina e cromatografia em coluna são três tipos de técnicas cromatográficas. A principal diferença entre cromatografia em papel, cromatografia em camada fina e cromatografia em coluna é baseada no tipo de fase estacionária usada na técnica de cromatografia. A cromatografia em papel usa um papel de celulose como fase estacionária, a cromatografia em camada fina usa alumina ou sílica gel como fase estacionária, enquanto a cromatografia em coluna usa uma coluna embalada com um material de matriz adequado como fase estacionária.

no processo de separação e identificação de biomoléculas como proteínas e carboidratos, a cromatografia é uma importante técnica Biofísica utilizada. A cromatografia separa os compostos com base em sua solubilidade, tamanho e carga. Com base no mecanismo de separação, a cromatografia utiliza mecanismos como troca iônica, absorção, partição e exclusão de tamanho e existem três técnicas cromatográficas; ou seja, papel, camada fina e cromatografia em coluna. A cromatografia de papel é baseada na adsorção sólido-líquido e solubilidade do composto, e usa um papel de celulose como fase estacionária. A cromatografia de camada fina é baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Tem uma fase estacionária que é tipicamente feita de alumina ou sílica gel e a fase móvel que é o solvente. A cromatografia de coluna usa uma coluna embalada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou sua carga.

conteúdo

1. Visão Geral da cromatografia e diferença de Chave
2. O que é Cromatografia em papel
3. O que é cromatografia de camada fina
4. O que é cromatografia de coluna
5. Semelhanças entre Papel, camada fina e cromatografia em coluna
6. Comparação lado a lado – Papel vs camada fina vs cromatografia de coluna em forma Tabular
7. Resumo

o que é Cromatografia em papel?

a cromatografia em papel é o tipo mais simples de cromatografia usada e não é usada para pesquisas extensas. É usado principalmente em laboratórios estudantis para identificar biomoléculas como aminoácidos e carboidratos presentes em misturas. A cromatografia de papel usa uma fase estacionária que é feita usando papel de celulose ou papel de filtro Whatman e uma fase móvel que geralmente é preparada usando solventes orgânicos, como n-butanol, etc. A fase estacionária é saturada com água, tornando a fase estacionária líquida. Assim, quando os compostos são manchados e autorizados a funcionar na presença da fase móvel, dependendo da solubilidade dos compostos, eles são separados. Assim, após o desenvolvimento do cromatograma, a coloração pode ser feita para determinar a execução do comprimento de cada composto. O Fator de retenção pode, assim, ser calculado.

a cromatografia em papel pode ser ainda classificada como cromatografia em papel ascendente e cromatografia em papel descendente, dependendo da direção do solvente em execução.

o que é cromatografia de camada fina?

a cromatografia de camada fina ou TLC é uma técnica comumente usada para identificar diferentes aminoácidos presentes em uma mistura ou para a identificação de proteínas. A técnica de separação é baseada na adsorção sólido-líquido. Durante a cromatografia de camada fina, uma placa feita de alumina ou sílica gel é usada como fase estacionária. A mistura de solventes varia de acordo com a necessidade e pode usar diferentes combinações de compostos orgânicos, como n-butanol, ácido acético e água para preparar o solvente. Os compostos a serem separados são manchados na placa e imersos na mistura de solventes. Uma vez que o solvente viaja acima baseado na ação capilar dada pela placa, os compostos manchados na placa igualmente movem-se segundo sua solubilidade no solvente.

a detecção das manchas após o cromatograma é realizada por diferentes procedimentos de coloração. Alguns usam coloração ninidrina que é um método bastante tóxico de coloração. Os cromatogramas modernos de camada fina usam técnicas de fluorescência para visualizar o cromatograma após a execução. Dependendo das distâncias percorridas, o tempo de retenção de cada composto pode ser calculado. Isso pode ser usado para identificar o tipo de composto separado com base na mistura usada. O TLC é usado principalmente para identificar aminoácidos em uma mistura de proteínas e também para separar diferentes tipos de monossacarídeos presentes em uma mistura.

o que é cromatografia de coluna?

cromatografia de coluna é um termo amplo usado para descrever muitos tipos de técnicas de cromatografia que usam o método de separação baseado em coluna. Na cromatografia de coluna, uma coluna física é usada com um material de embalagem para separar os compostos. A separação pode ser baseada em diferentes propriedades físicas exibidas pelos compostos. Essas propriedades podem ser a carga, tamanho, conformação 3D e capacidade de ligação, etc. Assim, a coluna embalada com o material da matriz atua como a fase estacionária e o tampão de lavagem aplicado à coluna atua como a fase móvel.

se as moléculas forem separadas com base no tamanho, o material de embalagem é embalado de uma maneira que deixa os poros para os compostos viajarem. Assim, as moléculas maiores que não podem fluir através dos poros são eluídas primeiro, enquanto as moléculas menores levam muito mais tempo para eluir.

se as moléculas forem separadas com base em sua carga, a fase estacionária conterá um trocador de Ânions ou cátions ao qual os compostos serão atraídos com base em sua carga. Assim, durante a etapa de lavagem, os compostos não ligados serão eluídos. Ao adicionar o buffer de eluição, os compostos carregados ligados serão eluídos. A detecção desses eluentes é baseada principalmente em técnicas espectrofotométricas.

quais são as semelhanças entre a camada fina de Papel e a cromatografia em coluna?

• todas as técnicas de cromatografia de camada fina e Coluna De Papel são usadas para separação de biomoléculas, como aminoácidos, proteínas e carboidratos.
• as técnicas de cromatografia de camada fina de Papel e coluna têm uma fase móvel e uma fase estacionária.
• as técnicas de cromatografia de camada fina e Coluna De Papel usam mecanismos biofísicos para separação.

Qual é a diferença entre a camada fina de Papel e a cromatografia em coluna?

Papel vs Camada Fina vs Coluna de Cromatografia
Papel de Cromatografia	Papel de cromatografia é uma técnica cromatográfica usa para separar compostos com base em líquido-líquido, adsorção e solubilidade do composto. Ele usa um papel de celulose como sua fase estacionária.
cromatografia de camada fina	a cromatografia de camada fina é outra técnica cromatográfica baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Tem uma fase estacionária feita de alumina ou sílica gel e um solvente como a fase móvel, que é o solvente.
cromatografia de coluna	a cromatografia de coluna usa uma coluna embalada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga.
fase estacionária
Cromatografia em papel	papel feito de nitrocelulose de Whatman é usado como fase estacionária na cromatografia em papel.
cromatografia de camada fina	Alumina ou sílica gel é usado como a fase estacionária da cromatografia de camada fina.
cromatografia de coluna	uma coluna embalada com material de embalagem adequado é usada como fase estacionária na cromatografia de coluna.
fase móvel
Cromatografia em papel	o solvente em execução é a fase móvel da cromatografia em papel.
cromatografia de camada fina	o solvente em execução é a fase móvel da cromatografia de camada fina.
cromatografia de coluna	Wash buffer é a fase móvel da cromatografia de coluna.
mecanismos utilizados para a separação
Cromatografia em papel	a cromatografia em papel é baseada na absorção sólido-líquido.
cromatografia de camada fina	a cromatografia de camada fina é baseada na absorção sólido-líquido.
a cromatografia da coluna	a cromatografia da coluna é baseada na exclusão, na carga e na forma do tamanho.
tampão eluição
Cromatografia em papel	não exigida pela cromatografia em papel.
cromatografia de camada fina	não necessária para cromatografia de camada fina.
cromatografia de coluna	necessária na cromatografia de coluna.
detecção
Cromatografia em papel	coloração e determinação do fator de retenção.
cromatografia de camada fina	coloração e determinando o Fator de retenção.
Cromatografia em coluna	determinação espectrofotométrica.

resumo – papel camada fina vs Cromatografia em coluna

cromatografia em papel, TLC e cromatografia em coluna são técnicas de separação usadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos e carboidratos (principalmente monossacarídeos). A cromatografia de papel usa um papel de celulose como fase estacionária, e o mecanismo de separação é baseado na adsorção sólido-líquido. O TLC também usa mecanismos de adsorção sólido-líquido. As moléculas são separadas na fase estacionária, dependendo de sua solubilidade na fase móvel. A cromatografia em coluna usa propriedades físicas, como tamanho, forma, carga e o peso molecular do composto para separar. A coluna embalada com o material da matriz atua como a fase estacionária, visto que o amortecedor da lavagem atua como a fase solvente. Esta é a diferença entre uma camada fina de papel e cromatografia em coluna.

referência:

1.Clark, Jim. “CROMATOGRAFIA DE CAMADA FINA.”Cromatografia De Camada Fina, 2007. Disponível aqui
2.Coskun, Ozlem. “Técnicas De Separação: Cromatografia.”Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Disponível aqui

Imagem cortesia:

1.”Chromatography tank” (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2.’Sequência Tlc’ por Quantockgoblin, (Domínio público) via Commons Wikimedia
3.’Cromatografia de coluna’ (Domínio público) via Commons Wikimedia